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　　ELISA試劑盒現在是被廣泛使用，效果也是得到大家的認可。不過大家在使用ELISA試劑盒的時候也是要多加注意，防止出現意外。而用ELISA試劑盒實驗時也是很容易出錯的，而加樣就是其中一種。那么怎樣防止ELISA試劑盒實驗加樣時出錯呢?　　1、用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過標本的小孔看過去下面的字會變小，沒加的字正常，非常容易區分。　　3、在標本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產生小氣泡，可以區分。　　2、人胰多肽(PP)ELISA 試劑盒可以利用液面反光與沒有加的孔加以區別。

　　廣泛應用在免疫學查驗的各領域中的ELISA試劑盒，有著靈敏度高、特異性強、經濟性較好等長處。本公司elisa試劑盒僅用于科研，不用于臨床。在試驗過程中肯定會有許多科研朋友是不明白的，今日就給我們介紹一下elisa試劑盒的使用辦法。 　　一：試驗操作程序簡述 　　1. 預備試劑，樣品和規范品； 　　2. 參加預備好的樣品和規范品，37℃反響30分鐘； 　　3. 洗板5次，參加酶標試劑，37℃反響30分鐘； 　　4. 洗板5次，參加顯色液A、B，37℃反響10分鐘； 　　5. 參加停止液； 　　6. 15分鐘之內度OD值； 　　7. 核算。 　　二：競賽法測抗原 　　小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因而不能用雙抗體夾心法進行測定，能夠選用競賽法形式。其原理是標本中的抗原和必定量的酶標抗原競賽與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。 　　三：包被的條件 　　包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時刻，包被液的pH等應根據試驗的特色和材料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般選用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中參加包被液后，在4-8℃冰箱中放置放置一個晚上，37℃中保溫2小時被以為具有平等的包被作用。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的改變，每批材料需經過試驗與酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。 　　四：抗原和抗體 　　制備結合物時所用抗體一般 均為純度較高的IgG，防止在與酶聯合時其他雜蛋白的攪擾。應該用親和層析純的抗體，這樣悉數酶結合物均具有特異的免疫活性，能夠在高稀釋度進行反響，試驗結果本底淺淡。如用F(ab')2進行符號，則更可防止標本中RF的攪擾。 　　ELISA試劑盒的種屬分類是怎樣的？常見檢測種屬有人、大鼠、小鼠、豬等。在測守時，受檢標本與固相載體外表的抗原或抗體起反響，用洗滌的辦法使固相載體上構成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分隔。再參加酶符號的抗原或抗體，也經過反響而結合在固相載體上。此刻固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈必定的份額。

　　如今市場上生物試劑的種類繁多，而且還有著一些黑心商人，售賣一些不合格的生物試劑，這是會對實驗造成很大的影響。那面對琳瑯滿目的產品市場我們該如何分辨其質量的好壞呢？今天就由小編來為您解析。　　1、實驗純（LR，黃標簽）：主成分含量高，純度較差，雜質含量不做選擇，只適用于一般化學實驗和合成制備。　　2、當量試劑（3N、4N、5N）：主成分含量分別為99.9%、99.99%、99.999%以上。　　3、指示劑和染色劑（ID或SR，紫標簽）：要求有特有的靈敏度。　　4、光譜純：主要成分純度為99.99%　　5、 質量級別：優級純（GR，綠標簽）：主成分含量很高、純度很高，適用于精確分析和研究工作，有的可作為基準物質。　　6、分析純（AR，紅標簽）：主成分含量很高、純度較高，干擾雜質很低，適用于工業分析及化學實驗。相當于國外的ACS級（美國化學協會標準）　　7、指定級（ZD）：按照用戶要求的質量控制指標，為特定用戶訂做的生物試劑。　　8、化學純（CP，藍標簽）：主成分含量高、純度較高，存在干擾雜質，適用于化學實驗和合成制備。　　9、電子純（MOS）：適用于電子產品生產中，電性雜質含量極低。

　　有很多一些新手ELISA試驗人員來說，試驗做得不理想是難免的事。這不，就在近期一個朋友找小編咨詢。這位朋友說道：“初度用間接法做ELISA試驗，做了幾回結果都沒有顯色，原因在哪里呢”　　可能原因有這幾個方面：　　1.包被原：包括你的包被液有無問題，有沒有配錯。包被原一般加100微升，37度2小時；　　2.關閉：關閉液用的是否合適？你說做了幾回都沒顯色，空白孔也不顯嗎？假如空白也無色彩，那關閉就沒有問題。一般關閉是200微升每孔，也能夠滿孔關閉　　3.一抗：查看你的一抗是否失效。是否是在37度反響　　4.二抗：底物，底物緩沖液……這些都要好好查看！　　5.洗刷：用PBST洗刷，包被和關閉時洗板3次；一抗二抗洗刷5次，每次間隔3分鐘。手工和機器洗刷沒什么不同，就是省力一些。洗5次不會有負影響，在一抗和二抗洗刷過程中，恰恰需求多洗幾回，這樣有助于削減非特異性吸附。

　　在ELISA試劑盒操作過程中總是會呈現或大或小的問題，比如說花板、假陽性、全顯色、信號值比空白還低等等。今日為咱們帶來了一些實驗經驗總結，教您這樣操作ELISA試劑盒實驗不會失利。　　1.有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質咱們要事前對其改造再加以包被，我把辦法扼要的列出如下：　　2.親和素生物素：先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結實，已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。　　3.小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯后才干固定在固相載體上。包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這聯系到你做出的抗體可不能夠 被其辨認，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格正告我必定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。　　4.脂類物質：可將其在有機溶劑中溶解后參加Elisa板孔中，開蓋置冰箱過夜或涼風吹干，待酒精蒸發后，讓脂質天然干固在固相外表。　　5.應留心以下原理：因為蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間 的效果，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質一般含有更多的疏水基團，故更易 吸附到固相載體外表。包被液的挑選，一般挑選ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時因為實驗的需求，包被原的特殊性也可能選用中性的緩沖溶液來包。 具體的實驗還要有鞏固的理論外也要實踐，看一下**可不能夠應用到自己實驗當中去。常用的包被液除了方才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有 pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。　　6.但**選用什么，要根據實驗具體來實踐。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，能夠高濃度使 用(5%－10%)；還有一些稀有用到的各種動物血清(首要為了掃除類似蛋白攪擾)和酪蛋白等等。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些曠地空閑，然后排擠ELISA試劑盒后的過程中攪擾物質的再吸附。封閉：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。　　7.在洗板時會有必定差錯，人為因素很大(當然有前提的用洗板機除外)，洗的不完全或串了孔，對如斯敏捷的ELISA體系但是不小的影響。因為 聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，為到達別離游離的和結合的酶符號物的意圖，鏟除殘留在板孔中游離的物質，以及非特異性地吸附的干 擾物質，在洗刷時又應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。洗刷板：能夠說在ELISA操作中，洗刷是首要的紐帶技能。　　8.加抗體標本(和二抗)：留意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要留意二抗的作業濃度， 太高浪費，太低則上色淺。　　9.顯色：顯色體系又很多，咱們一開始做的時候，要挑選適合的顯色體系。留意顯色體系酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加 疊氮鈉。　　10.每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如呈現問題也好剖析。