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DAB染色液的使用方法及注意事項

2018-03-23

DAB染色液用于免疫組化染色，應用在Dako 自動染色系統上。 DAB染色液的使用方法 1.DAB顯色液配制 10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3，3-二氨基聯苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,顯色時加入5-10mL 30%H2O2 混勻后立即使用 2. 顯色準備好含有待測蛋白的固相膜：包括電泳、轉印、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟。 3.加入適量的DAB顯色液，鋪滿整個固相膜表面（可按比例增減）。 4. 置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育2至5分鐘，避免光照（暗室操作），直至棕褐色沉淀出現。 5.用鑷子夾起固相膜，放進無離子水里清洗。 6.空氣中晾干。 7. 拍照記錄。 DAB染色液的注意事項 1． DAB溶液應低溫密封保存。如有結晶析出，應確保結晶完全溶解再行使用； 2．顯色工作液應現用現配，新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色，如顏色過深，請勿使用； 3． DAB在常溫下不穩定，每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱，以免因DAB分解影響實驗，或因滲漏造成實驗環境污染； 4． DAB有潛在致突變作用，操作時應注意穿戴好防護用具。

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