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孤腓肽ELISA試劑盒運用雙抗體夾心法測定標本中（產品名稱）水平。用純化的其抗體包被微孔板，制成固相抗體。往包被單抗的微孔中順次參加本產品，再與HRP符號的其抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過完全洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終究的黃色。色彩的深淺和樣品呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），經過規范曲線核算樣品中產品的濃度。
試劑盒組成：
1、30倍濃縮洗刷液20ml×1瓶7停止液6ml×1瓶
2、酶標試劑6ml×1瓶8規范品（240ng/L）0.5ml×1瓶
3、酶標包被板12孔×8條9規范品稀釋液1.5ml×1瓶
4、樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5、顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6、顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求：
1．標本收集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立刻進行實驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免重復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3按捺辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作過程：
1.規范品的稀釋：本試劑盒供給原倍規范品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120ng/L5號規范品150μl的原倍規范品參加150μl規范品稀釋液
60ng/L4號規范品150μl的5號規范品參加150μl規范品稀釋液
30ng/L3號規范品150μl的4號規范品參加150μl規范品稀釋液
15ng/L2號規范品150μl的3號規范品參加150μl規范品稀釋液
7.5ng/L1號規范品150μl的2號規范品參加150μl規范品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、規范孔、待測樣品孔。在酶標包被板上規范品精確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終究稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
操作程序總結：
1.預備試劑，樣品和規范品
2.參加預備好的樣品和規范品，37℃反響30分鐘
3.洗板5次，參加酶標試劑，37℃反響30分鐘
4.洗板5次，參加顯色液A、B，37℃反響10分鐘
5.參加停止液
6.15分鐘之內度OD值
7.核算
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可運用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗刷液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗刷時不影響成果。
3．各步加樣均應運用加樣器，并常常校正其精確性，以避免實驗誤差。一次加樣時刻**控制在5分鐘內，如標本數量多，引薦運用排槍加樣。
4．請每次測定的一起做規范曲線，**做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于規范品孔榜首孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋必定倍數（n倍）后再測定，核算時請*終乘以總稀釋倍數（×n×5）。
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