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以下是影響ELISA檢測的關鍵要素，也是很多ELISA 用戶在試驗中常常遇到的問題及處理方案 ：
Q1：為什么一切試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作？
A1：溫度是ELISA結合反響的重要影響要素。為了使一切樣本在一致的溫度下反響，試驗前務 必將一切試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動力學反響差異而導致ELISA檢測結 果的不精確。
Q2：為什么規范曲線線性較差？
A2：依照引薦方法保存規范品；溶解規范品之前需時刻短離心，徹底搜集粉末；確保規范品徹底 溶解和混勻（大約10min），然后再進行后續的系列稀釋進程，確保每一步都充沛混勻且精確 移液；顯色的恰當停止；挑選適宜的數學擬合方程制作規范曲線。
Q3：ELISA試驗為什么有必要設置復孔？
A3：為取得更精確的試驗成果，強烈建議規范品及樣本進行復孔檢測。 由于復孔檢測能夠：
★核算平均值，確保試驗成果更精確；
★處理試驗中誤操作形成的跳孔現象；
★核算CV值，對試驗的操作和試劑盒的精密度進行評價。
Q4：為什么試驗進程中孵育、洗刷需求振動？怎么振動？
A4：振動孵育使反響更充沛，振動洗刷使布景更潔凈。建議運用酶標專用96孔微孔板振動器。
孵育進程振動，能夠加速、加強抗原抗體間的彼此磕碰觸摸，使得反響進程愈加徹底，OD值通
常會比未振動孵育的成果要高；洗刷進程振動，能夠使洗板更潔凈，在很大程度上能下降布景 值，同時能夠進步試劑盒檢測的靈敏度。
Q5：何時停止ELISA反響？
A5：ELISA試驗zui終需求酶催化底物顯色反響來完結，在zui適宜的時刻停止反響是ELISA試驗成
功的重要要素。在HRP-TMB酶反響體系中，當zui高濃度規范品色彩不再變深，倒數2-3個濃度標
準品色彩開端有淺藍色時，便需求停止反響；或許也能夠根據zui高濃度規范品孔在620nm的OD
值來決議，OD620=0.9-0.95之間時即可停止。
Q6：為什么酶標儀讀數時有必要選用雙波長？
A6：首要，酶標儀運用前必須預熱10-15min，使測讀成果更安穩。其次，ELISA試驗采用雙波
長測定吸光度，能夠掃除單波長檢測時的測定攪擾（標本的濃度，攪擾色等）。一般采用zui大
波長作為參照波長，在參照波長下，檢測物的吸光值zui小，檢測波長和參照波長的吸光值之差
能夠消除非特異性吸收；因而，雙波長測定，可zui大極限的消除指紋、雜質及不透光的物質對 酶標儀讀數帶來的差錯，以確保試驗數據的精確度。
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