廣泛應用在免疫學查驗的各領域中的ELISA試劑盒,有著靈敏度高、特異性強、經濟性較好等長處,這樣就讓ELISA試劑盒很受歡迎。但不是所有人都了解ELISA試劑盒,今日就給我們介紹一下elisa試劑盒的使用辦法。
一:試驗操作程序簡述
1. 預備試劑,樣品和規范品;
2. 參加預備好的樣品和規范品,37℃反響30分鐘;
3. 洗板5次,參加酶標試劑,37℃反響30分鐘;
4. 洗板5次,參加顯色液A、B,37℃反響10分鐘;
5. 參加停止液;
6. 15分鐘之內度OD值;
7. 核算。
二:競賽法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的位點,因而不能用雙抗體夾心法進行測定,能夠選用競賽法形式。其原理是標本中的抗原和必定量的酶標抗原競賽與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
三:包被的條件
包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時刻,包被液的pH等應根據試驗的特點和資料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般選用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中參加包被液后,在4-8℃冰箱中放置放置一個晚上,37℃中保溫2小時被以為具有平等的包被作用。包被的zui恰當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的改變,每批資料需經過試驗與酶結合物的濃度和諧選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
四:抗原和抗體
制備結合物時所用抗體一般 均為純度較高的IgG,防止在與酶聯合時其他雜蛋白的攪擾。zui好用親和層析純的抗體,這樣悉數酶結合物均具有特異的免疫活性,能夠在高稀釋度進行反響,試驗結果本底淺淡。如用F(ab')2進行符號,則更可防止標本中RF的攪擾。
ELISA試劑盒的種屬分類是怎樣的?常見檢測種屬有人、大鼠、小鼠、豬等。在測守時,受檢標本與固相載體外表的抗原或抗體起反響,用洗刷的辦法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分隔。再參加酶符號的抗原或抗體,也經過反響而結合在固相載體上。此刻固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈必定的份額。