現在做ELISA實驗的人是有著很多的人,不過遇到的問題也是有很多,而新手出現的問題就更多了。之前就有一個朋友問題,為什么做ELISA實驗會不顯色,是什么原因?那今天小編就這個問題給大家分析一下,為什么ELISA實驗會出現不顯色的結果。
1.包被原:包括你的包被液有無問題,有沒有配錯。包被原一般加100微升,37度2小時;
2.封閉:封閉液用的是否適合?你說做了幾次都沒顯色,空白孔也不顯嗎?如果空白也無顏 色,那封閉就沒有問題。一般封閉是200微升每孔,也可以滿孔封閉
3.一抗:檢查你的一抗是否失效。是否是在37度反應
4.二抗:底物,底物緩沖液……這些都要好好檢查!
5.洗滌:用PBST洗滌,包被和封閉時洗板3次;一抗二抗洗滌5次,每次間隔3分鐘。手工和機器洗滌沒什么不同,就是省力一些。洗5次不會有負影響,在一抗和二抗洗滌過程中,恰恰需要多洗幾次,這樣有助于減少非特異性吸附。
以上幾種(zhong)就是ELISA實驗不顯色的原因,希(xi)望看完(wan)這些介(jie)紹,能夠幫助朋友們解除(chu)疑惑。