皮質醇ELISA試劑盒是可以根據實驗工作量以及難易程度，再采用不同的標本和操作方法的，對該試劑盒加入終止液的，得避免起泡，導致液體造成假陽性的，終止液加入后就輕輕的放下。使終止液與板孔內溶液充分混勻；酶標板讀數前，應輕輕拭去板底的水跡和污物，保證板底干潔，以免影響讀數；應根據底物液選擇合適的讀數波長，如TMB一般選擇450nm波長，PNPP一般選擇405nm波長等；加入終止液后，應盡快讀板，酶標板內顏色會隨著終止時間的延長而變淡。
該試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗，預先被皮質醇捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的皮質醇呈正相關。需要用酶標儀在450nm波長下測定吸光度，計算樣品濃度。
應嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。預處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。皮質醇ELISA試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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