1、取出試劑盒，放置于室溫20度25度)30分鐘。
2、分組：取出96口井板，根據待測樣品數和標準產品數確定所需條帶，繼續對剩余板條進行冷藏，并分別建立標準產品組(6個濃度)、空白孔和待測樣品組。
注：為減小實驗誤差，保證精度，建議設置復合孔。
3、樣品添加：按標準產品的順序，在空白微孔中加入100μl標準溶液，在空白對照孔中加入100μl蒸餾水，在其它微孔中加入100μl標準溶液。
4、酶標準溶液：在標準產品組和待測樣品組(空白對照孔除外)的每個孔中加入50μl酶標準溶液。
5、培養：酶標板用密封紙密封后，用37℃在濕箱中孵育1小時。
6、洗衣板：將稀釋后的洗滌劑灌滿每個孔，設定15次30秒30，將酶標板洗5次，用吸水紙徹底沖洗干。
7、顯色：在每個孔加入顯色劑A液50μl后，再加入顯色劑B液50μl。
8、終止：在25℃-37℃時，避光反應為10 min 15 min，加入50μl終止液。
9、讀寫板：在波長450 nm處讀出每個孔的O值。
注：在讀取極板時，應將盤子底部殘留的液體和指印烘干，并應在反應結束后30分鐘內控制讀數時間，以免影響準確度。
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