自從70年代初，ELISA首次被介紹到病毒檢測中以來，它的發展是如此之快，以至于在此領域的許多用途中，它已成為＊主要的檢測方法。ELISA的基礎是抗體與抗原之間的高度特異性反應。它不僅廣泛應用于各種抗原和抗體的檢測，而且成為病毒、細胞、毒素等分離和純化的有效工具。
1971年，Engvall和Perlmann發表了有關直接酶聯免疫吸附試驗的開創性文章。他們將抗原吸附在聚苯乙烯微量板孔中，然后加入特異性抗體。清洗后，再加入酶標記的第二抗體，＊后加入底物，根據顏色反應即可判斷有無免疫反應的存在。這就是我們通常所說的間接ELISA。
1978年，Buehler和Hood使用堿性磷酸酶(AP)標記抗體，以檢測抗AP的抗體。這是間接酶聯免疫吸附試驗的一種變種，主要用于檢測免疫反應的試劑。
1979年，Wallac公司推出了以熒光素為底物的酶聯免疫吸附試驗法，這為定量ELISA的發展奠定了基礎。隨著各種新型標記物的出現，如堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶、葡萄糖氧化酶等，使得酶聯免疫吸附試驗既可定性又可定量。
1980年以后，先后出現了許多改進的ELISA方法。如雙抗體夾心法測抗原、一步法測抗體等。一步法是近年來發展的一種快速ELISA方法，其原理類似于雙抗體夾心法，不同的是僅用一種酶標抗體既可完成兩個步驟的顯色反應。另外，還有間接夾心法測抗原、間接一步法測抗體等。
1983年，Wallac公司在生產固相時間分辨熒光免疫分析系統時，為了簡化操作過程和縮短測定時間，發明了一種一步法熒光酶聯免疫吸附測定(ELISA)，稱為超靈敏熒光酶聯免疫吸附測定(Enzyme Linked Immunosorbent Fluorescent Assay, ELIFA)。
近年來又出現了以生物素與親和素系統為標記物的ELISA法。親和素是一種分子量小、生物活性強的糖蛋白，可與4個生物素分子結合。由于生物素與鏈霉親和素之間的結合力非常強(Ka=1015)，使得生物素與鏈霉親和素系統成為一個極好的放大系統。另外，該系統的另一個優點是顏色穩定時間長。常用的生物素—鏈霉親和素系統是采用鏈霉親和素或生物素直接包被載體，而不用酶標抗體或酶標抗原。因為生物素與鏈霉親和素的結合力非常強，在孵育過程中能顯著地減少背景干擾，提高了方法的特異性和敏感性。此外，該系統的生物素與鏈霉親和素的作用時間非常短，只要孵育幾分鐘就能完成結合過程。
生物素—鏈霉親和素系統是一個非均相系統。當將反應體系從非均相系統轉移到均相系統時，就會產生放大效應。例如，用生物素標記抗原與親和素包被的微孔板結合后，再加入熒光標記的抗生物素蛋白(鏈霉抗生物素蛋白或羊抗生物素蛋白)進行反應。當抗原與生物素標記的抗體結合后，就可通過鏈霉親和素的放大作用和熒光標記的抗生物素的結合使信號得到放大。
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