小鼠纖連蛋白1(FN-1)ELISA試劑盒ELISA試劑盒技術流程 雙抗體夾心法(檢測未知抗原)間接法(檢測未知抗體)1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)3、加酶標抗體：于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,＊后一遍用DDW洗滌。4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 ELISA試劑盒需自備的設備及試劑 1. 450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)2. 單道或多道微量加液器及吸頭3. 稀釋樣品的EP管4. 蒸餾水或去離子水5. 吸水紙6. 盛放洗液的容器 性能:1．準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。2．靈敏度：檢測濃度小于10 pg/ml。3．特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4．重復性：板內、板間變異系數均小于15%。 ELISA試劑盒優點：1、高效、靈敏、特異的抗體；2、重復性和可靠性高；3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型；5、可檢測指標齊全：細胞因子檢測、心肌梗塞檢測、內分泌檢測、肝纖維化檢測、自身免疫檢測、腫瘤標志物檢測、傳染病檢測、特種蛋白檢測、優生優育檢測等等；6、價格優惠，質量保證，限度的節省實驗經費。 實驗步驟1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。 注意事項劑盒的儲存及有效期1. 未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。2. 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。 須知：試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在首次實驗后1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩定的。 ELISA試劑盒報1、ELISA標準曲線；2、詳細的實驗步驟；3、完整的實驗報告（試劑耗材，實驗方法，實驗結果及結果說明）； [樣本處理及要求]1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。＊后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。4. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。注：標本溶血會影響＊后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。 [需要而未提供的試劑和器材]1.酶標儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒溫箱4.蒸餾水或去離子水 ELISA檢測試劑盒承諾公司長期與各大高校、醫院及權威科研單位保持著良好的合作關系，公司的產品質量及服務態度得到了他們的一致認可。篤瑪生物本著客戶至上的原則為客戶提供優質產品，公司承諾產品有任何質量的問題免費包退換（非人為因素造成的）。公司提供免費代測服務，并且承諾收到樣本七個工作日出結果，確保數據的準確性 小鼠纖連蛋白1(FN-1)ELISA試劑盒試驗原理：本試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標記的抗原或抗體（結合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；（5）結合物及標本的稀釋液；（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；（7）酶反應終止液，常用的HRP反應終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的*終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。 ELISA試劑盒實驗數據的計算處理方法1、擬和曲線：輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400輸入第二行：該濃度下的調整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42選擇這些輸入的數據，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向導，在“標準類型”中選擇“xy散點圖”;在“子圖表類型”中選擇“折線散點圖”，按“下一步”;選擇“系列產生在行”，按“下一步”;數據標志，可以填寫：如數據y軸，OD值;數據x軸，濃度;按下一步，點擊完成。可得曲線圖。單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線”，在類型中，選擇多項式;在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。得到公式和R平方值。也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數據中，就可以擬和曲線。 2、計算濃度：第一次實驗：標準曲線為：y = -4E-05x2 + 0.026xR2 = 0.9745為例，已知OD值，計算濃度。由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：4E-05x2 -0.026x +y=0ax2 +bx +y=0特別說明:#.一周內使用可存于4℃，需長時間存放或多次使用建議存于-20℃.化學發光免疫分析試劑盒1.在各孔中加入標準品或樣品各100μL，37°C孵育90分鐘2.倒去孔內液體，拍干，加入100μL生物素化抗體工作液，37°C孵育 60分鐘3.洗滌3次4.加入 100μL酶結合物工作液，37°C孵育 30分鐘5.洗滌5次6.加入100μL 發光底物混合液，37°C孵育5分鐘左右7.立即測定各孔的化學發光值8.結果計算 ELISA試劑盒優勢：1、抗體----高效、靈敏、特異性好2、規范包被操作----吸附均勻、吸附性好、空白值低、孔底透明度高3、優化方案----重復性高，可靠性強4、高標準技術服務要求：靈敏度高，特異性強 5、適用范圍廣：血漿、血清、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等多種類型的樣本 ELISA試劑盒操作步驟：1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。4.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。 服務承諾：一、產品品質保障（打造高品質產品，若產品質量存在任何問題，公司一律包退包換，質量有保障，解除了客戶的后顧之憂）二、提供免費代測服務（我司擁有專業酶免技術的工作人員為客戶提供來樣檢測服務,限度實驗結果的有效性）三、提供全程技術指導（專業的科順技術人員進行指導）四、全天在線服務（如果您在使用ELISA試劑盒產品時有任何的疑問，或者對我們有任何意見建議，您都可以通過來電或咨詢。） [說明]1.由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產品可能存在一定的質量技術風險。2.＊終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關，請務必準備充足的標本備份。3.不同批次的同一產品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內說明書進行實驗操作，網站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到＊佳的檢測結果。5.本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。6.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。7.若樣本為細胞培養上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態、細胞數量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。 ELISA檢測試劑盒承諾公司長期與各大高校、醫院及權威科研單位保持著良好的合作關系，公司的產品質量及服務態度得到了他們的一致認可。篤瑪生物本著客戶至上的原則為客戶提供優質產品，公司承諾產品有任何質量的問題免費包退換（非人為因素造成的）。公司提供免費代測服務，并且承諾收到樣本七個工作日出結果，確保數據的準確性。
細胞色素b5含量測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞色素b5含量測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
紅霉素-N-脫甲基酶（ERND）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍紅霉素-N-脫甲基酶（ERND）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
苯胺-4羥化酶（AH）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍苯胺-4羥化酶（AH）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
氨基比林-N-去甲基化酶（AND）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍氨基比林-N-去甲基化酶（AND）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
NADPH-細胞色素C還原酶（NCR）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍NADPH-細胞色素C還原酶（NCR）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
外切-β-1，4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶（C1）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍外切-β-1，4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶（C1）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
內切-β-1，4-葡聚糖酶（Cx）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍內切-β-1，4-葡聚糖酶（Cx）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍細胞壁不溶性酸性轉化酶（B-AI）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
322