蘋果酸合酶（MS）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍蘋果酸合酶（MS）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
異檸檬酸裂解酶（ICL)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍異檸檬酸裂解酶（ICL)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
順烏頭酸酶(ACO)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍順烏頭酸酶(ACO)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
甲基檸檬酸合酶(MCS）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍甲基檸檬酸合酶(MCS）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷 細菌（Bacteria）葉酸（FA）ELISA 檢測試劑盒 使用說明書 檢測原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往 預先包被葉酸（FA）抗體的包被微孔中，依次加入標本、 標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯 色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成 ＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的葉酸（FA）呈正相關。 用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細 胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心 地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘 取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存 于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項 1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解 后再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保 存。 3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明 書操作時樣本已經稀釋 5 倍，＊終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成96孔配置48孔配置備注微孔酶標版12孔*8條12孔*4條無標準品0.3ml*6管0.3ml*6管無樣本稀釋液6ml3ml無檢測抗體-HRP10ml5ml無20*洗滌緩沖液25ml15ml按說明書進行稀釋底物A6ml3ml無底物B6ml3ml無終止液6ml3ml無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、10、20、40、80、160 ng/ml 試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌 緩沖液加 19 份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡 孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。 2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 操作步驟 1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自 封袋密封放回 4℃。 2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μ L；3. 樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL(即樣本稀 釋 5 倍)；空白孔不加。4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶 （HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋 或恒溫箱溫育 60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去 洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。結果判斷繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應 OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣 本濃度值。試劑盒性能 1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值，大于等于 0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測濃度小于 1.0 ng/ml。 3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內、板間變異系數均小于 15%。 5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6 個月 免責聲明 1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所 產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。 2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔細菌（Bacteria）葉酸（FA）ELISA 檢測試劑盒FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. urobilin ELISA Kit instruction Intended use This urobilin ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of urobilin in the sample, this urobilin ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus urobilin concentration. The concentration of urobilin in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve. Sample collection and storages Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles Plasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles. Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed. Materials required but not supplied 1. Standard microplate reader(450nm) 2. Precision pipettes and Disposable pipette tips. 3. 37 ℃ incubator Precautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer. 2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided. 3. Mix all reagents before using. Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C) Materials supplied Name 96 determinations 48 determinations Microelisa stripplate 12*8strips 12*4strips Standard 0.3ml*6tubes 0.3ml*6tubes Sample Diluent 6.0ml 3.0ml HRP-Conjugate reagent 10.0ml 5.0ml 20X Wash solution 25ml 15ml Chromogen Solution A 6.0ml 3.0ml Chromogen Solution B 6.0ml 3.0ml Stop Solution 6.0ml 3.0ml Closure plate membrane 2 2 User manual 1 1 Sealed bags 1 1Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,10,20,40,80,160 ng/ml Reagent preparation 20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all r e a g e n ts before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well. 3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add 40μl of Sample Diluent to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting. 4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Washfllygs.com Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels. 6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light. 7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing. 8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes. Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve. 5. The sensitivity by this assay is 1.0 ng/ml 6. Standard curvefllygs.com Storage： 2-8℃. validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷 人（Human）尿膽素（urobilin）ELISA 檢測試劑盒使用說明書 檢測原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往 預先包被尿膽素（urobilin）抗體的包被微孔中，依次加入標本、 標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯 色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成 ＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿膽素（urobilin）呈正相關。 用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細 胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心 地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘 取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存 于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項 1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解 后再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保 存。 3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明 書操作時樣本已經稀釋 5 倍，＊終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成96孔配置48孔配置備注微孔酶標版12孔*8條12孔*4條無標準品0.3ml*6管0.3ml*6管無樣本稀釋液6ml3ml無檢測抗體-HRP10ml5ml無20*洗滌緩沖液25ml15ml按說明書進行稀釋底物A6ml3ml無底物B6ml3ml無終止液6ml3ml無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、10、20、40、80、160 ng/ml 試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌 緩沖液加 19 份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡 孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。 2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 操作步驟 1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自 封袋密封放回 4℃。 2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μ L；3. 樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL(即樣本稀 釋 5 倍)；空白孔不加。4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶 （HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋 或恒溫箱溫育 60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去 洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。結果判斷繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應 OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣 本濃度值。試劑盒性能 1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值，大于等于 0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測濃度小于 1.0 ng/ml。 3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內、板間變異系數均小于 15%。 5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6 個月 免責聲明 1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所 產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。 2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔人（Human）尿膽素（urobilin）ELISA 檢測試劑盒FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Human urobilin ELISA Kit instruction Intended use This urobilin ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of urobilin in the sample, this urobilin ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus urobilin concentration. The concentration of urobilin in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve. Sample collection and storages Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles Plasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles. Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed. Materials required but not supplied 1. Standard microplate reader(450nm) 2. Precision pipettes and Disposable pipette tips. 3. 37 ℃ incubator Precautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer. 2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided. 3. Mix all reagents before using. Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C) Materials supplied Name 96 determinations 48 determinations Microelisa stripplate 12*8strips 12*4strips Standard 0.3ml*6tubes 0.3ml*6tubes Sample Diluent 6.0ml 3.0ml HRP-Conjugate reagent 10.0ml 5.0ml 20X Wash solution 25ml 15ml Chromogen Solution A 6.0ml 3.0ml Chromogen Solution B 6.0ml 3.0ml Stop Solution 6.0ml 3.0ml Closure plate membrane 2 2 User manual 1 1 Sealed bags 1 1Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,10,20,40,80,160 ng/ml Reagent preparation 20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all r e a g e n ts before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well. 3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add 40μl of Sample Diluent to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting. 4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Washfllygs.com Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels. 6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light. 7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing. 8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes. Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve. 5. The sensitivity by this assay is 1.0 ng/ml 6. Standard curvefllygs.com Storage： 2-8℃. validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
異檸檬酸裂解酶（ICL)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍異檸檬酸裂解酶（ICL)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
順烏頭酸酶(ACO)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍順烏頭酸酶(ACO)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
羥甲基戊二酰輔酶A合成酶（HMGCS）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍羥甲基戊二酰輔酶A合成酶（HMGCS）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
甲基檸檬酸合酶(MCS）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些???生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微量法和分光光度法的區別?分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。如何防止試劑盒失效?????不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。熒 光 分 析 法?????????熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等著拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理??生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?? ?生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。2)樣本處理后＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。微 量 分 析 法? ?????????微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析????????微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。????????一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。????????微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍甲基檸檬酸合酶(MCS）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的?NADH?經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成?ATP?的同時,形成大量的?ROS,同時?NADH?再生為?NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和?NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和?TCA?循環的強弱。較高的NAD(H)及?NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和?TCA?循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分別用酸性和堿性提取液提取樣品中?NAD+和?NADH,NADH?通過?PMS?的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在?570nm?下檢測吸光值;而?NAD+可被乙醇脫氫酶還原為?NADH,進一步采用?MTT?還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶標儀、臺式離心機、移液器、96?孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;堿性提取液:液體?50mL×1?瓶,4℃保存;試劑一:液體?10 mL×1?瓶,4℃保存;試劑二:液體?3 mL×1?瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1?瓶,-20?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑四:粉劑×1?瓶,4?℃保存,用時加入?3mL?蒸餾水,混勻,用不完的試劑?4℃保存一周;試劑五:液體?3.6mL×1?瓶,4?℃保存;試劑六:液體?30mL×1?瓶,4?℃保存;試劑七:液體?50mL×1?瓶,4?℃保存。NAD+和?NADH?的提取:1?血清(漿)中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL?血清(漿),加入?1mL?酸性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1mL血清(漿),加入?1mL?堿性提取液),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。2?組織中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為?1:5~10?的比例(建議取約?0.1g?組織,加入?1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心?10min,取上清,置冰上待測。3?細胞或細菌中?NAD+和?NADH?的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):酸性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH?的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104?個):堿性提取液體積(mL)為?500~1000:1?的比例(建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或?200W,超聲?3s,間隔?10s,重復?30?次),95℃水浴?5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4?℃離心?10min;取?500μL?上清液,加入?500μL?酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4?℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置?5min?后,20000g,25℃離心?5min,棄上清,沉淀中加入:混勻,取?200μL?轉移至微量石英比色皿或?96?孔板中,570nm?下讀取對照吸光值?A1?和測定管吸光值?A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應?20min?后再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若?NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH?測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間?20min?延長到?60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取?0.2g?樣本或?0.2mL?樣本加入?1mL?提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒?100?管保證測?48?個?NAD+或?NADH.NAD+和?NADH?含量的計算:(一) NAD+含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中?y?為△A,x?為?NAD+濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中?NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g?鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH?含量的計算標準條件下的回歸曲線為?y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中?y?為△A,x?為?NADH?濃度?nmol/mL1、血清(漿)中?NADH?含量計算NADH?含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中?NADH?含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g?鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500?萬。注?意:?檢測限為?0.1nmol/mL?或?0.1nmol/g?鮮重?或?0.001nmol/mg prot
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