? ??人二磷酸腺苷（ADP）ELISA檢測試劑盒??試劑盒性能1. 特異性高：由于是抗原抗體的特異性結合，因此試驗的特異性很高，能夠排除其他物質的干擾。2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗的靈敏度大大提高，能夠檢測出微量的抗原或抗體。3. 操作簡便：ELISA試驗操作相對簡單，容易掌握，適合于大規模樣本檢測。4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、抗體和激素等生物分子。???樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。?實驗原理? ? ? 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被相關指標的抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。??試劑盒組成??操作步驟?1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲抗體或抗原。2)封閉:孔內加入封閉劑(如牛血清白蛋白或羧甲基纖維素)，阻止非特異性蛋白質結合。3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標抗原或抗體的樣本。4)洗滌:去除未結合的物質。5)檢測抗體添加:加入對特定抗原有特異性的酶標記檢測抗體。6) 再次洗滌:再次去除未結合的檢測抗體。7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產生顏色變化。8)終止反應:加入終止溶液停止酶的反應(在某些類型的ELISA中需要)。9) 讀數:使用光譜光度計測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下)，吸光度與樣本中抗原或抗體的濃度成正比。?人二磷酸腺苷（ADP）ELISA檢測試劑盒標本的采集及保存1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。?2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。?3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。)???結果分析根據試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數據處理，通過計算得到待測樣品的濃度。???免責聲明試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔， 本公司概不負責。嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。?
僅供研究使用 小鼠二磷酸腺苷（ADP）ELISA試劑盒實驗原理： 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠4-羥基壬烯醛(4-HNE)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠4-羥基壬烯醛(4-HNE)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份密封袋1個1個封板膜12孔×4條2片（96）2-8℃保存微孔酶標板1×4812孔×8條2-8℃保存標準品0.3mL*6管0.3mL*6管2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數量與表格是否一致。試劑盒操作步驟： 實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。小鼠二磷酸腺苷（ADP）ELISA 試劑盒 標本的采集及保存：血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。)標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制實驗結果計算： 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。注意事項：1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鐘內，如標本數量多，建議使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。5.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。7.底物請避光保存。8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。試劑盒性能1．準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。2．靈敏度：＊低檢測濃度小于10 pg/ml。3．特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4．重復性：批內與批見應分別小于9%和15%。
人含纈酪肽蛋白（VCP）ELISA檢測試劑盒 實驗原理 ELISA運用了免疫學原理和化學反應顯色原理，需要將抗原或抗體預包被在固相載體表面，使后來形成的抗原-抗體-酶 (熒光基團) -底物復合物黏附在載體上，通過檢測OD值或發光值，來檢測靶蛋白的含量。 實驗所需自備物品1. 酶標儀（450nm）2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱 人含纈酪肽蛋白（VCP）ELISA檢測試劑盒試劑盒組成名稱96 孔配置48 孔配置備注微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無標準品0.5mL0.5mL按說明書進行稀釋標準品稀釋液6mL3mL按說明書進行稀釋樣本稀釋液6mL3mL按說明書進行稀釋檢測抗體-HRP6mL3mL無20×洗滌緩沖液20mL20mL按說明書進行稀釋底物 A6mL3mL無底物 B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2 張2 張無說明書1 份1 份無自封袋1 個1 個無 操作步驟1. 準備工作：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使試劑盒恢復至室溫。同時準備好實驗所需的材料和器具。2. 加樣：在酶標板的弟1個孔中加入標準品50μL，然后在后續的孔中依次加入待測樣本50μL。3. 溫育：將酶標板密封，在37℃下溫育30分鐘。4. 洗滌：用洗滌液清洗酶標板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內液體。5. 加酶：在每個孔中加入酶標物100μL。6. 溫育：再次將酶標板密封，在37℃下溫育30分鐘。7. 洗滌：用洗滌液清洗酶標板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內液體。8. 加底物：在每個孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。9. 終止反應：在每個孔中加入終止液50μL。10. 檢測：用酶標儀在450nm波長下讀取各孔的吸光度（OD值）。 結果分析根據標準品和樣本的OD值，繪制標準曲線，從而計算出樣本中角蛋白1（KRT1）的濃度。具體分析方法可參考試劑盒說明書或相關文獻。注意事項1. 在操作過程中，應保持酶標板的干燥，避免水分進入孔內。2. 加樣時需確保加樣準確、無氣泡產生。3. 溫育和洗滌過程中需嚴格控制時間和溫度，確保實驗結果的準確性。4. 在使用酶標儀讀取OD值時，需確保波長設置正確，避免誤差產生。5. 在整個實驗過程中，需保持操作環境的清潔和整潔，避免交叉污染。
? ??人（Human）載脂蛋白 E（apo-E）ELISA 檢測試劑盒??試劑盒性能1. 特異性高：由于是抗原抗體的特異性結合，因此試驗的特異性很高，能夠排除其他物質的干擾。2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗的靈敏度大大提高，能夠檢測出微量的抗原或抗體。3. 操作簡便：ELISA試驗操作相對簡單，容易掌握，適合于大規模樣本檢測。4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、抗體和激素等生物分子。???樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。?實驗原理? ? ? 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被相關指標的抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。??試劑盒組成??操作步驟?1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲抗體或抗原。2)封閉:孔內加入封閉劑(如牛血清白蛋白或羧甲基纖維素)，阻止非特異性蛋白質結合。3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標抗原或抗體的樣本。4)洗滌:去除未結合的物質。5)檢測抗體添加:加入對特定抗原有特異性的酶標記檢測抗體。6) 再次洗滌:再次去除未結合的檢測抗體。7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產生顏色變化。8)終止反應:加入終止溶液停止酶的反應(在某些類型的ELISA中需要)。9) 讀數:使用光譜光度計測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下)，吸光度與樣本中抗原或抗體的濃度成正比。?標本的采集及保存1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。?2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。?3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。)???結果分析根據試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數據處理，通過計算得到待測樣品的濃度。???免責聲明試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔， 本公司概不負責。嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。?
?人P物質(SP)ELISA試劑盒實驗原理? ? ? 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被相關指標的抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。試劑盒性能1. 特異性高：由于是抗原抗體的特異性結合，因此試驗的特異性很高，能夠排除其他物質的干擾。2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗的靈敏度大大提高，能夠檢測出微量的抗原或抗體。3. 操作簡便：ELISA試驗操作相對簡單，容易掌握，適合于大規模樣本檢測。4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、抗體和激素等生物分子。試劑盒組成試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20倍濃縮洗滌液20ml×1瓶23ml×1瓶2-8℃保存操作步驟人P物質(SP)ELISA試劑盒1. 對應板孔中加入100μL標準品工作液或樣本，37℃孵育90分鐘2. 棄掉板內液體后，立即加入100μL生物su化抗體工作液，37℃孵育60分鐘3. 棄掉板內液體，洗板3次4. 每孔加入100μL HRP酶結合物工作液，37℃孵育30分鐘，棄掉板內液體，洗板5次5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分鐘左右6. 每孔加入50μL終止液7. 立即在450nm波長下讀數，處理數據標本的采集及保存1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。?2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。?3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。)?免責聲明試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔， 本公司概不負責。嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。相關產品DM5394人微管關聯蛋白(MAPτ)酶聯免疫試劑盒DM5395人TGF-β誘導早期應答基因1(TIEG1)酶聯免疫試劑盒?DM5396人Toll樣受體2(TLR2)酶聯免疫試劑盒DM5397人Toll樣受體9(TLR9)酶聯免疫試劑盒DM5398人TU3A蛋白(TU3A)酶聯免疫試劑盒DM5399人蛋白酶激活受體3(PAR3)酶聯免疫試劑盒DM5400人T細胞活化連接蛋白(LAT)酶聯免疫試劑盒DM5401人T細胞急性淋巴母細胞白血病相關抗原(TALLA-1/CD231)酶聯免疫試劑盒DM5402人T細胞生長因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)酶聯免疫試劑盒?DM5403人T細胞受體(TCR)酶聯免疫試劑盒DM5404人T細胞特異性鳥苷三磷酸酶(Tgtp)酶聯免疫試劑盒DM5405人β-骨膠原交聯(β-CTx)酶聯免疫試劑盒
本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷人（Human）甲胎蛋白（AFP）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被甲胎蛋白（AFP）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲胎蛋白（AFP）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱操作注意事項1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3. 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，＊終結果乘以5才是樣本實際濃度。4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、2、4、8、16、32 ng/mL試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。結果判斷 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。 試劑盒性能1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測濃度小于0.1 ng/mL。3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6個月免責聲明1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Human Alpha-fetoprotein (AFP) ELISA Kit instruction Intended useThis AFP ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of AFP in the sample, this AFP ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus AFP concentration. The concentration of AFP in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,2,4,8,16,32 ng/ml.Reagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 0.1 ng/ml6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷人（Human）白蛋白（ALB）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被白蛋白（ALB）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白蛋白（ALB）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱操作注意事項1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3. 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，＊終結果乘以5才是樣本實際濃度。4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、6.25、12.5、25、50、100 mg/mL試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。結果判斷 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。 試劑盒性能1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測濃度小于1.0 mg/mL。3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6個月免責聲明1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Human Albumin (ALB) ELISA Kit instruction Intended useThis ALB ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of ALB in the sample, this ALB ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus ALB concentration. The concentration of ALB in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,6.25,12.5,25,50,100 mg/mLReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 0.1 mg/mL6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
僅供研究使用 小鼠4-羥基壬烯醛(4-HNE)ELISA試劑盒實驗原理： 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠4-羥基壬烯醛(4-HNE)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠4-羥基壬烯醛(4-HNE)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份密封袋1個1個封板膜12孔×4條2片（96）2-8℃保存微孔酶標板1×4812孔×8條2-8℃保存標準品0.3mL*6管0.3mL*6管2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數量與表格是否一致。試劑盒操作步驟： 實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。小鼠4-羥基壬烯醛(4-HNE)ELISA 試劑盒 標本的采集及保存：血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。)標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制實驗結果計算： 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。注意事項：1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鐘內，如標本數量多，建議使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。5.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。7.底物請避光保存。8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。試劑盒性能1．準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。2．靈敏度：＊低檢測濃度小于10 pg/ml。3．特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4．重復性：批內與批見應分別小于9%和15%。
?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??小鼠活性氧(ROS)ELISA試劑盒實驗原理????ELISA運用了免疫學原理和化學反應顯色原理，需要將抗原或抗體預包被在固相載體表面，使后來形成的抗原-抗體-酶 (熒光基團) -底物復合物黏附在載體上，通過檢測OD值或發光值，來檢測靶蛋白的含量。???實驗所需自備物品1. 酶標儀（450nm）2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱???試劑盒組成名稱96 孔配置48 孔配置備注微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無標準品0.5mL0.5mL按說明書進行稀釋標準品xishi液6mL3mL按說明書進行稀釋樣本xishi液6mL3mL按說明書進行稀釋檢測抗體-HRP6mL3mL無20×洗滌緩沖液20mL20mL按說明書進行稀釋底物?A6mL3mL無底物?B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2 張2 張無說明書1 份1 份無自封袋1 個1 個無?操作步驟?1. 準備工作：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使試劑盒恢復至室溫。同時準備好實驗所需的材料和器具。2. 加樣：在酶標板的弟1個孔中加入標準品50μL，然后在后續的孔中依次加入待測樣本50μL。3. 溫育：將酶標板密封，在37℃下溫育30分鐘。4. 洗滌：用洗滌液清洗酶標板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內液體。5. 加酶：在每個孔中加入酶標物100μL。6. 溫育：再次將酶標板密封，在37℃下溫育30分鐘。7. 洗滌：用洗滌液清洗酶標板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內液體。8. 加底物：在每個孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。9. 終止反應：在每個孔中加入終止液50μL。10. 檢測：用酶標儀在450nm波長下讀取各孔的吸光度（OD值）。小鼠活性氧(ROS)ELISA試劑盒結果分析根據標準品和樣本的OD值，繪制標準曲線，從而計算出樣本中角蛋白1（KRT1）的濃度。具體分析方法可參考試劑盒說明書或相關文獻。?注意事項1. 在操作過程中，應保持酶標板的干燥，避免水分進入孔內。2. 加樣時需確保加樣準確、無氣泡產生。3. 溫育和洗滌過程中需嚴格控制時間和溫度，確保實驗結果的準確性。4. 在使用酶標儀讀取OD值時，需確保波長設置正確，避免誤差產生。5. 在整個實驗過程中，需保持操作環境的清潔和整潔，避免交叉污染。洗板方法1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠谷胱甘肽過氧化酶4(GPX4)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠谷胱甘肽過氧化酶4(GPX4)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中小鼠谷胱甘肽過氧化酶4(GPX4)的含量；2.試劑盒保存：2-8℃；3.有效期：6個月。小鼠谷胱甘肽過氧化酶4(GPX4)ELISA試劑盒標本的采集及保存1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。) 標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 操作步驟 實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。 洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。5.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4 ℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本， 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時，-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 小鼠谷胱甘肽過氧化酶4(GPX4)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。2.批內與批見應分別小于9%和15%
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