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　　做ELISA試劑盒實驗是能夠遇到各種不同的情況，不過導致實驗出問題總是有原因的。有時候ELISA試劑盒實驗會出現吸光值變高的情況，這就讓很多人不解了，不知道是什么原因造成的，要怎樣解決。今天就給大家說一下。　　吸光值均偏高(或線性不夠陡)。　　a.原因：室溫太高(>25℃)。　　解決辦法： 若無法降低室內溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。　　b.原因：底物溶液受到污染。　　解決辦法： 若發現底物溶液已呈現淡藍色，請不要再使用。　　c.原因：反應時間超過太久。　　解決辦法：請控制反應時間。　　d.原因：酶標記物污染了盒內其它試劑。　　解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

　　ELISA試劑盒現在是被廣泛使用，效果也是得到大家的認可。不過大家在使用ELISA試劑盒的時候也是要多加注意，防止出現意外。而用ELISA試劑盒實驗時也是很容易出錯的，而加樣就是其中一種。那么怎樣防止ELISA試劑盒實驗加樣時出錯呢?　　1、用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過標本的小孔看過去下面的字會變小，沒加的字正常，非常容易區分。　　3、在標本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產生小氣泡，可以區分。　　2、人胰多肽(PP)ELISA 試劑盒可以利用液面反光與沒有加的孔加以區別。

　　有很多一些新手ELISA試驗人員來說，試驗做得不理想是難免的事。這不，就在近期一個朋友找小編咨詢。這位朋友說道：“初度用間接法做ELISA試驗，做了幾回結果都沒有顯色，原因在哪里呢”　　可能原因有這幾個方面：　　1.包被原：包括你的包被液有無問題，有沒有配錯。包被原一般加100微升，37度2小時；　　2.關閉：關閉液用的是否合適？你說做了幾回都沒顯色，空白孔也不顯嗎？假如空白也無色彩，那關閉就沒有問題。一般關閉是200微升每孔，也能夠滿孔關閉　　3.一抗：查看你的一抗是否失效。是否是在37度反響　　4.二抗：底物，底物緩沖液……這些都要好好查看！　　5.洗刷：用PBST洗刷，包被和關閉時洗板3次；一抗二抗洗刷5次，每次間隔3分鐘。手工和機器洗刷沒什么不同，就是省力一些。洗5次不會有負影響，在一抗和二抗洗刷過程中，恰恰需求多洗幾回，這樣有助于削減非特異性吸附。

　　鵝ELISA試劑盒選用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被鵝半胱氨酸蛋白酶8（Casp-8）捕獲抗體的包被微孔中，順次參加標本、規范品、HRP符號的檢測抗體，通過溫育并徹底洗刷。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終究的黃色。色彩的深淺和樣品中的鵝半胱氨酸蛋白酶8（Casp-8）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），核算樣品濃度。用于體外定量檢測血清、血漿、安排、細胞上清及相關液體樣本中鵝半胱氨酸蛋白酶8（Casp-8）的含量。其標本處理如下： 　　1、 主張運用新鮮樣本，保存時刻過長可能會存在蛋白降解或變性導致試驗成果誤差。 　　2、運用化學裂解液制備的安排勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引進導致ELISA試驗成果誤差。 　　3、請運用者運用前充沛考慮到樣本的可能運用量，預留足夠的樣本。 　　4、某些天然蛋白或重組蛋白，包含原核及真核重組蛋白，可能由于與本產品所運用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。 　　5、若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，主張進行預試驗驗證其有效性，并注意留存樣本。 　　6、若樣本為細胞培養上清，因該類樣本攪擾要素較多，如：細胞狀況、細胞數量、采樣時刻等，所以可能存在檢測不出的狀況。 　　7、試驗前應猜測標本含量，假如標本濃度過高，應對標本進行稀釋，使稀釋后的標本契合鵝ELISA試劑盒的檢測規模，核算時再乘以相應的稀釋倍數。標本運用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。

　　1. 產品有哪幾種規范？可檢測多少個樣本？　　產品分為48T和96T兩種規范。　　FpDbreMgiNGfZmY62I_xdUWsgYGt.jpg 　　每次試驗的規范曲線一般設5個不同濃度，加上空白孔，規范曲線總共需求11個孔。因而，一個48T試劑盒zui多能夠測定37個樣本（不做重復且一次用完），一個96T試劑盒zui多能夠測定85個樣本（不做重復且一次用完）。能夠依據實踐樣本數量和試驗方案挑選適宜的產品規范。　　2.48T和96T的試劑盒有哪些不同？　　48T和96T的試劑盒，每個孔的反響系統都是徹底相同的。不同的是試劑盒中各組分的規范，詳見說明書。　　3. 產品的安穩性怎么？　　產品在研制前期已經過嚴厲的安穩測驗，發貨前亦須經過檢測并供給質檢陳述，在市場上深受廣大客戶的贊賞！　　4.一次ELISA試驗需求多長時間？　　雙抗體夾心ELISA法一次試驗需求4-4.5小時，競賽ELISA法一次試驗需求2-2.5小時。　　5. 血漿樣本怎么處理？　　應依據標本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，細心搜集上清。保存過程中如有沉積構成，應再次離心。　　6.細胞上清液樣本怎么處理？　　檢測排泄性的成份時，用無菌管搜集。離心20分鐘左右（1000×g）。細心搜集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度到達100萬/ml左右。經過重復凍融，以使細胞損壞并放出細胞內成份。離心10分鐘左右（5000×g）。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構成，應再次離心。　　7. 試劑盒做的成果不抱負怎么辦？　　試驗成果不抱負請及時與客服或，咱們能夠幫您一同剖析試驗成果。假如僅憑試驗數據無法判別，您能夠將試劑盒發回給咱們進行售后檢測。假如是試劑盒自身的質量問題，能夠為您退換貨；假如是試驗操作的問題，技術人員能夠給您一些改善的主張。