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　　如今市場上生物試劑的種類繁多，而且還有著一些黑心商人，售賣一些不合格的生物試劑，這是會對實驗造成很大的影響。那面對琳瑯滿目的產品市場我們該如何分辨其質量的好壞呢？今天就由小編來為您解析。　　1、實驗純（LR，黃標簽）：主成分含量高，純度較差，雜質含量不做選擇，只適用于一般化學實驗和合成制備。　　2、當量試劑（3N、4N、5N）：主成分含量分別為99.9%、99.99%、99.999%以上。　　3、指示劑和染色劑（ID或SR，紫標簽）：要求有特有的靈敏度。　　4、光譜純：主要成分純度為99.99%　　5、 質量級別：優級純（GR，綠標簽）：主成分含量很高、純度很高，適用于精確分析和研究工作，有的可作為基準物質。　　6、分析純（AR，紅標簽）：主成分含量很高、純度較高，干擾雜質很低，適用于工業分析及化學實驗。相當于國外的ACS級（美國化學協會標準）　　7、指定級（ZD）：按照用戶要求的質量控制指標，為特定用戶訂做的生物試劑。　　8、化學純（CP，藍標簽）：主成分含量高、純度較高，存在干擾雜質，適用于化學實驗和合成制備。　　9、電子純（MOS）：適用于電子產品生產中，電性雜質含量極低。

　　在ELISA試劑盒操作過程中總是會呈現或大或小的問題，比如說花板、假陽性、全顯色、信號值比空白還低等等。今日為咱們帶來了一些實驗經驗總結，教您這樣操作ELISA試劑盒實驗不會失利。　　1.有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質咱們要事前對其改造再加以包被，我把辦法扼要的列出如下：　　2.親和素生物素：先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結實，已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。　　3.小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯后才干固定在固相載體上。包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這聯系到你做出的抗體可不能夠 被其辨認，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格正告我必定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。　　4.脂類物質：可將其在有機溶劑中溶解后參加Elisa板孔中，開蓋置冰箱過夜或涼風吹干，待酒精蒸發后，讓脂質天然干固在固相外表。　　5.應留心以下原理：因為蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間 的效果，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質一般含有更多的疏水基團，故更易 吸附到固相載體外表。包被液的挑選，一般挑選ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時因為實驗的需求，包被原的特殊性也可能選用中性的緩沖溶液來包。 具體的實驗還要有鞏固的理論外也要實踐，看一下**可不能夠應用到自己實驗當中去。常用的包被液除了方才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有 pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。　　6.但**選用什么，要根據實驗具體來實踐。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，能夠高濃度使 用(5%－10%)；還有一些稀有用到的各種動物血清(首要為了掃除類似蛋白攪擾)和酪蛋白等等。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些曠地空閑，然后排擠ELISA試劑盒后的過程中攪擾物質的再吸附。封閉：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。　　7.在洗板時會有必定差錯，人為因素很大(當然有前提的用洗板機除外)，洗的不完全或串了孔，對如斯敏捷的ELISA體系但是不小的影響。因為 聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，為到達別離游離的和結合的酶符號物的意圖，鏟除殘留在板孔中游離的物質，以及非特異性地吸附的干 擾物質，在洗刷時又應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。洗刷板：能夠說在ELISA操作中，洗刷是首要的紐帶技能。　　8.加抗體標本(和二抗)：留意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要留意二抗的作業濃度， 太高浪費，太低則上色淺。　　9.顯色：顯色體系又很多，咱們一開始做的時候，要挑選適合的顯色體系。留意顯色體系酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加 疊氮鈉。　　10.每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如呈現問題也好剖析。

　　ELISA試劑盒檢測中血漿一般可視為與血清平等的標本，標本中攪擾性物質是引起檢測后成果偏高或偏低的主要原因，攪擾性物質分為內源性物質和外源性物質兩大類：　　1．內源性物質　　常見的攪擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、穿插反響物質和其它物質等。　　（1）類風濕因子 ：血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）在ELISA試劑盒檢測中，可與ELISA試劑盒體系中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結合，然后導致檢測OD值偏高。　　（2）補體 ：ELISA試劑盒體系中固相一抗和符號二抗過程中，抗體分子發作變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 能夠將二者連接起來，然后形成檢測OD值偏高。　　（3）嗜異性抗體　　人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA試劑盒體系中一抗和二抗連接起來，也能形成檢測OD值偏高。　　此外血清中嗜靶抗原本身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、穿插反響物質及血清中脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對ELISA試劑盒測定成果有攪擾效果。　　2．外源性物質　　外源性物質常常是因為用于ELISA試劑盒測定的血標本的收集、儲存等不妥所造成的。如標本溶血、標本被細菌污染、標本儲存過久、標本凝聚 不全和采血管中添加物等影響。　　（1）標本溶血　　因為各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞損壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為符號的ELISA試劑盒測定中，會導致非特異性顯色，攪擾測定成果。　　（2）標本受細菌污染 ：因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本相同，亦可發生非特異性顯色而攪擾測定成果。

　　ELISA試劑盒保存在2-8℃，運用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這歸于正常現象，水浴加熱使結晶徹底溶解后再運用。試驗中不必的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。規范品稀釋液即可視為陰性對照或許空白；預處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。嚴厲依照闡明書中標明的時刻、加液量及順序進行溫育操作。一切液體組分運用前充沛搖勻。 　　ELISA試劑盒功能： 　　1. 準確性：規范品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。 　　2. 靈敏度：檢測濃度小于1.0 IU/L。 　　3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反響。 　　4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。 　　5. 儲藏：2-8℃，避光防潮保存。

　　科研試劑的保存存在一定的特殊性，許多客戶將Elisa試劑盒冷凍保存后擔心會有影響。建議我們將試劑盒凍結后一次用完。我們知道，一般來的試劑盒保質期在半年到一年，切不可重復凍融。Elisa試劑盒冷凍后直接運用有影響，對一些弱陽性標本的檢測呈現假陰性。 　　正確的操作方法是：先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒運用前與室溫平衡。這樣做的意圖，首要是為了在后面的溫育反響過程中，能使反響微孔內的溫度能較快地到達所要求的高度，以滿意測定要求。