CTCF Monoclonal Antibody Catalog No DM-00964 Isotype IgG Reactivity Human;Monkey Applications WB;ELISA Gene Name CTCF Protein Name Transcriptional repressor CTCFImmunogen Purified recombinant fragment of human CTCF expressed in E. Coli. Specificity CTCF Monoclonal Antibody detects endogenous levels of CTCF protein. Formulation Ascitic fluid containing 0.03% sodium azide,0.5% BSA, 50%glycerol. Source Monoclonal, Mouse Purification Affinity purificationDilution Western Blot: 1/500 - 1/2000. ELISA: 1/10000. Not yet tested in other applications. Concentration 1 mg/ml Purity ≥90% Storage Stability -20°C/1 year Synonyms CTCF; Transcriptional repressor CTCF; 11-zinc finger protein; CCCTC-binding factor; CTCFL paralog Observed Band Cell Pathway Nucleus, nucleoplasm . Chromosome . Chromosome, centromere . May translocate to the nucleolus upon cell differentiation. Associates with both centromeres and chromosomal arms during metaphase. Associates with the H19 ICR in mitotic chromosomes. May be preferentially excluded from heterochromatin during interphase. Tissue Specificity Ubiquitous. Absent in primary spermatocytes. Function function:Transcriptional repressor binding to promoters of vertebrate c-myc gene. Also binds to the PLK and PIM1 promoters. May prevent the access of transcriptional activators to enhancers. Also acts as a transcriptional activator of APP. Involved in different aspects of gene regulation including promoter activation or repression, hormone-responsive gene silencing, methylation-dependent chromatin insulation, and genomic imprinting. Seems to act as tumor suppressor.,similarity:Belongs to the CTCF zinc-finger protein family.,similarity:Contains 11 C2H2-type zinc fingers.,subunit:Interacts with CHD8.,tissue specificity:Ubiquitous. Absent in primary spermatocytes.,Background This gene is a member of the BORIS + CTCF gene family and encodes a transcriptional regulator protein with 11 highly conserved zinc finger (ZF) domains. This nuclear protein is able to use different combination
ZN143 rabbit pAb Catalog No DM-09315 Isotype IgGReactivity Human;Mouse;Rat Applications WB Gene Name ZNF143 SBF STAF Protein Name Zinc finger protein 143 (SPH-binding factor) (Selenocysteine tRNA gene transcription-activating factor) (hStaf) Immunogen Synthesized peptide derived from human ZN143 AA range: 518-568 Specificity This antibody detects endogenous levels of human ZN143 Formulation Liquid in PBS containing 50% glycerol, 0.5% BSA and 0.02% sodium azide. Source Polyclonal, Rabbit,IgG Purification The antibody was affinity-purified from rabbit serum by affinity-chromatography using specific immunogen. Dilution WB 1:1000-2000 Concentration 1 mg/ml Purity ≥90% Storage Stability -20°C/1 year Synonyms Observed Band Cell Pathway Nucleus . Tissue Specificity Expressed in all tissues tested, with the strongest expression in ovary. Function Background matters needing attention Avoid repeated freezing and thawing! Usage suggestions This product can be used in immunological reaction related experiments. For more information, please consult technical personnel.
Elf-1 Polyclonal Antibody Catalog No DM-01689 Isotype IgGReactivity Human Applications WB;IHC;IF;ELISA Gene Name ELF1 Protein Name ETS-related transcription factor Elf-1 Immunogen The antiserum was produced against synthesized peptide derived from human ELF1. AA range:537-586 Specificity Elf-1 Polyclonal Antibody detects endogenous levels of Elf-1 protein. Formulation Liquid in PBS containing 50% glycerol, 0.5% BSA and 0.02% sodium azide. Source Polyclonal, Rabbit,IgG Purification The antibody was affinity-purified from rabbit antiserum by affinity-chromatography using epitope-specific immunogen. Dilution Western Blot: 1/500 - 1/2000. Immunohistochemistry: 1/100 - 1/300. Immunofluorescence: 1/200 - 1/1000. ELISA: 1/20000. Not yet tested in other applications. Concentration 1 mg/ml Purity ≥90% Storage Stability -20°C/1 year Synonyms ELF1; ETS-related transcription factor Elf-1; E74-like factor 1 Observed Band 67kD Cell Pathway Nucleus. Tissue Specificity In fetal tissues, it is highly expressed in heart, lung liver and kidney, and weakly expressed in brain. In adult, it is highly expressed in pancreas, spleen, thymus and peripheral blood leukocytes, expressed at moderate levels in heart, placenta, lung, liver, skeletal muscle, kidney, prostate, ovary, small intestine and colon, and weakly expressed in brain and testis. Function function:Transcription factor that activates the LYN and BLK promoters. Appears to be required for the T-cell-receptor-mediated trans activation of HIV-2 gene expression. Binds specifically to two purine-rich motifs in the HIV-2 enhancer.,PTM:Phosphorylated upon DNA damage, probably by ATM or ATR.,similarity:Belongs to the ETS family.,similarity:Contains 1 ETS DNA-binding domain.,subunit:Binds to the underphosphorylated form of RB. May interact with other transcription factors in order to regulate specific genes. Interacts with RUNX1.,tissue specificity:In fetal tissue, it is highly expressed in heart, lung liver and kidney, and weakly expressed in brain. In adult, it
Kinase experiment [1]: Preparation Method Prior to use, the [8-14C] adenosine was checked for purity using isocratic HPLC elution. The assay incubation mixture contained 0.4 IU of enzyme in 50 L. The metabolites were separated by thin-layer chromatography. The radioactivity was quantitated by cutting the plastic backed TLC plates and placing them in scintillation vials, and counting in a Packard 2000 CA scintillation counter Applications IC50: 0.15 (HIV-1, A012 isolate), 0.20 μM (HIV-1, A018 isolate). 3-Deazaadenosine (hydrochloride) is an inhibitor of S-adenosylhomocysteine hydrolase, with a Ki of 3.9 μM. Cell experiment [2]: Cell lines Mouse macrophage RAW 264.7 Preparation Method RAW 264.7 cells were pretreated with or without 3-Deazaadenosine (100 μMM) for 1 h, and stimulated by the addition of LPS (1 μg/ml). After incubation for 1 h, the cells were washed, and p65 was recovered by immunoprecipitation with anti-p65 and protein A-Sepharose. Reaction Conditions 0-100 μM 3-Deazaadenosine for 1 hour Applications 3-Deazaadenosine (1-100 ?M) inhibits LPS-induced expression of TNF-α mRNA, increases DNA binding activity of NF-κB, and causes proteolytic degradation of IκBα, but Not IκBβ in RAW 264.7 cells. 3-Deazaadenosine (100 μM) enhances nuclear translocation of NF-κB, but blocks LPS-induced NF-κB transcriptional activity, and such inhibition is augmented by the addition of homocysteine. Animal experiment [3]: Animal models Male, healthy Sprague–Dawley rats (300?50 g) Preparation Method Animals and balloon injury: rats were fed for 5 days prior and 14 days after the balloon injury with standard chow containing c3Ado at a concentration of 10 mg/kg 3-Deazaadenosine body weight. Dosage form 10 mg/kg 3-Deazaadenosine for 5 days prior and 14 days after the balloon injury Applications 3-deazaadenosine (c3Ado) inhibits atherogenesis in mice. Sprague Dawley rats underwent balloon angioplasty. C3Ado was administered orally, starting 5 days prior to the balloon injury and continued for 2 weeks. Fourteen days afte
本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷 細菌（Bacteria）葉酸（FA）ELISA 檢測試劑盒 使用說明書 檢測原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往 預先包被葉酸（FA）抗體的包被微孔中，依次加入標本、 標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯 色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成 ＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的葉酸（FA）呈正相關。 用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細 胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心 地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘 取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存 于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項 1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解 后再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保 存。 3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明 書操作時樣本已經稀釋 5 倍，＊終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成96孔配置48孔配置備注微孔酶標版12孔*8條12孔*4條無標準品0.3ml*6管0.3ml*6管無樣本稀釋液6ml3ml無檢測抗體-HRP10ml5ml無20*洗滌緩沖液25ml15ml按說明書進行稀釋底物A6ml3ml無底物B6ml3ml無終止液6ml3ml無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、10、20、40、80、160 ng/ml 試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌 緩沖液加 19 份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡 孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。 2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 操作步驟 1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自 封袋密封放回 4℃。 2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μ L；3. 樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL(即樣本稀 釋 5 倍)；空白孔不加。4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶 （HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋 或恒溫箱溫育 60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去 洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。結果判斷繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應 OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣 本濃度值。試劑盒性能 1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值，大于等于 0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測濃度小于 1.0 ng/ml。 3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內、板間變異系數均小于 15%。 5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6 個月 免責聲明 1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所 產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。 2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔細菌（Bacteria）葉酸（FA）ELISA 檢測試劑盒FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. urobilin ELISA Kit instruction Intended use This urobilin ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of urobilin in the sample, this urobilin ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus urobilin concentration. The concentration of urobilin in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve. Sample collection and storages Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles Plasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles. Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed. Materials required but not supplied 1. Standard microplate reader(450nm) 2. Precision pipettes and Disposable pipette tips. 3. 37 ℃ incubator Precautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer. 2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided. 3. Mix all reagents before using. Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C) Materials supplied Name 96 determinations 48 determinations Microelisa stripplate 12*8strips 12*4strips Standard 0.3ml*6tubes 0.3ml*6tubes Sample Diluent 6.0ml 3.0ml HRP-Conjugate reagent 10.0ml 5.0ml 20X Wash solution 25ml 15ml Chromogen Solution A 6.0ml 3.0ml Chromogen Solution B 6.0ml 3.0ml Stop Solution 6.0ml 3.0ml Closure plate membrane 2 2 User manual 1 1 Sealed bags 1 1Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,10,20,40,80,160 ng/ml Reagent preparation 20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all r e a g e n ts before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well. 3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add 40μl of Sample Diluent to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting. 4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Washfllygs.com Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels. 6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light. 7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing. 8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes. Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve. 5. The sensitivity by this assay is 1.0 ng/ml 6. Standard curvefllygs.com Storage： 2-8℃. validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
植物組織蔗糖含量檢測試劑盒說明書 微量法 注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。 貨號：YX-W-B502 規格：100T/96S 產品內容： 提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：粉劑 10mg×1 支，4℃保存，臨用前加入 1mL 蒸餾水溶解，用水稀釋 10 倍，備用，即 1mg/mL; 試劑二：液體 2mL×1 瓶，4℃保存； 試劑三：液體 20mL×1 瓶，4℃保存； 試劑四：液體 5mL×1 瓶，4℃保存； 試劑五：粉劑 0.5g×1 瓶，常溫保存。 植物組織蔗糖含量檢測試劑盒說明書 產品介紹： 蔗糖是植物光合作用的主要產物，也是糖分運輸和儲藏的主要形式。因此，測定蔗糖含量對 于植物糖代謝具有重要意義。此外，蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產品質量控 制的重要指標之一。 先用堿與樣品共熱，破壞其中的還原糖。酸性條件下蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖進一 步與間苯二酚反應，生成有色物質，在 480nm 下有特征吸收峰。 所需的儀器和用品： 可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸餾水。 操作步驟 一、樣品制備： 稱取0.1g 樣本，常溫研碎，加入0.5mL 提取液，適當研磨后快速轉移到離心管中，置于80℃水浴鍋中 10min，振蕩3~5 次，冷卻后，4000g，25℃離心10min，取上清，加入2mg試劑五，80℃脫色30min， 再加入0.5mL 提取液，4000g，25℃離心10min，取上清液測定。 二、測定步驟： 1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 480nm，蒸餾水調零。 2、樣本測定，（在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）： 試劑（μL）空白管標準管測定管樣本25 試劑一25 蒸餾水25 試劑二151515混勻，100℃煮沸 5min 左右（蓋緊，防止水分散失）試劑三175175175試劑四505050混勻，沸水浴反應 10min 左右，冷卻后取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中測定 480nm 處光吸 收值，空白管、標準管和測定管分別記為 A1、A2 和 A3 三、蔗糖含量計算： 1、按照蛋白質含量計算 蔗糖含量（mg/mg prot）= (C 標準管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr 此法需要自行測定蛋白濃度。 2、按照樣品質量計算 蔗糖含量(mg/g 鮮重）=(C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W C 標準管：標準管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。 本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！
實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被植物多糖(Pol)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物多糖(Pol)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中植物多糖(Pol)的含量；2.試劑盒保存：2-8℃；3.有效期：6個月。植物多糖(Pol)ELISA試劑盒標本的采集及保存1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。) 植物多糖(Pol)ELISA試劑盒 標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 植物多糖(Pol)ELISA試劑盒操作步驟 實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。植物多糖(Pol)ELISA試劑盒注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。 植物多糖(Pol)ELISA試劑盒洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。5.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4 ℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本， 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時，-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 植物多糖(Pol)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。2.批內與批見應分別小于9%和15%
植物磷脂酸（PA）酶聯免疫吸附測定試劑盒本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷 使用說 明書 l 本試劑盒用于植物萃取液或其它相關樣本樣本中植物磷脂酸（PA）的含量。l 有效期：6個月l 保存條件：2-8℃試劑盒組成：名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無備注：1. （96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。2. 標準品濃度依次為：100、50、25、12.5、6.25、0 nmol/L3. 經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過＊大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。檢測前準備工作：1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象；放置室溫，輕搖均勻，待結晶完全溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。實驗原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被植物磷脂酸（PA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物磷脂酸（PA）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品含量。實驗所需自備試驗器材：1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱4. 蒸餾水或去離子水樣本處理及要求：植物組織樣本ELISA檢測處理方法一、組織勻漿的制備： 1、取組織塊（0.1g-0.5g）＊少可到5-10mg在冰冷的PBS中漂洗，濾紙拭干，準確稱重，放入5ml的勻漿管中。 2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。 3、勻漿的方式：手工勻漿，機器勻漿。 ① 手工勻漿：左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6-8分鐘），充分研碎，制成10%的勻漿液。 ② 機器勻漿：用組織搗碎機10000-15000 轉/分上下研磨制成10%組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備（勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續3-5次，在冰水中進行,可適當延長勻漿時間），鏡檢觀察。4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機3000轉/分左右,離心10-15分鐘，取上清液進行測定。二、勻漿介質： 一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據樣本及測定指標的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環境。三、樣本保存： 1. 植物組織樣本暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如不反復凍融，-20℃以下可保 存三個月,-70℃以下可保存六個月。注意事項：1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。9. 不能使用過期產品。10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。操作步驟：1．從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2．設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。3．樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。樣本不足，或者樣本濃度過高，可用樣本稀釋液做稀釋。4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5．棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結果計算：繪制標準曲線：以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。 （此圖僅供參考）試劑盒性能：1. 檢測范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。2. 靈敏度：＊低檢測濃度小于0.78 nmol/L。3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。技術小提示：1. 當混合或重溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。2. 為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。3. 每次孵育時，請正確使用封板膠可保證結果的準確性。4. 混合后的顯色底物在上板前應為無色，請避光保存；加入微孔板后，將由無色變成不同深度的藍色。5. 終止液上板順序應同顯色底物上板順序一致；加入終止液后，孔內顏色由藍變黃；若孔內有綠色，則表明孔內液體未混勻；請充分混合。說明：1. 由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產品可能存在一定的質量技術風險。2. ＊終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關，請務必準備充足的標本備份。3. 不同批次的同一產品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內說明書進行實驗操作，網站電子版說明書僅作參考。4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到＊佳的檢測結果。
實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被硝酸還原酶(NR)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的硝酸還原酶(NR)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中硝酸還原酶(NR)的含量；2.試劑盒保存：2-8℃；3.有效期：6個月。植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒標本的采集及保存1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。) 植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒 標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒操作步驟 實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。 植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。5.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4 ℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本， 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時，-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。2.批內與批見應分別小于9%和15% 植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒
實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被Rubisco活化酶(RCA)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Rubisco活化酶(RCA)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中Rubisco活化酶(RCA)的含量；2.試劑盒保存：2-8℃；3.有效期：6個月。植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒標本的采集及保存1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。) 植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒 標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。 標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒操作步驟 實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。 3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。 植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。5.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4 ℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本， 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時，-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。2.批內與批見應分別小于9%和15% 植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒
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