抗凝新生牛血（無菌 袋裝） 用法 血清由冰凍狀態在常溫下完全融化成液體,搖均勻后放置 10-30 分鐘待結塊蛋白質沉底后即可使用。注意事項 有少量蛋白質結塊析出不影響使用。未融化或融化未經搖勻的血清禁止直接放入高溫水浴內加溫。減少血清重復凍融。血清在室溫或 4 ℃ 冰箱內放置過久會影響促細胞生長效果。解凍 將血清從冰凍區中取出后(切勿直接將血清從 -20 ℃ 進入 37 ℃ 解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀),先置于 2 ~ 8 ℃ 區域中使之融化,然后在室溫下使之全融。使用前再預溫到將使用的溫度(如 37 ℃ ),但必須注意的是,解凍過程中應輕輕地搖晃均勻。血清在解凍過程中可能會出現少量絮狀或片狀析出物,主要是血清中脂蛋白的變性或是纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)析出,但這些析出物,并不影響血清本身的質量。 若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。細胞培養的優點:1.研究的對象是活細胞在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。4.研究內容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。鑒別方法： 血液凝結析出的淡黃色通明液體。如將血液自血管內抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反響被激活，血液敏捷凝結，構成膠凍。其周圍所析出之淡黃色通明液體即為血清，也可于凝血后經離心獲得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉成為纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿zui大的差異。而在凝血反響中，血小板開釋出很多物質，各也都發生了改變。 這些成分都留在血清中并持續發生改變，如原成為，并隨血清寄存時刻逐步削減以致不見。這些也都是與血漿差異的地方。但很多未參與凝血反響的物質則與血漿根本一樣。為防止抗凝劑的攪擾，血液中很多化學成分的剖析，都以血清為樣品。血清保存應該注意以下幾點：(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂.(2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化.(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀.(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清.(5)血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理.顯微鏡下小黑點:經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象小黑點,常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.抗凝新生牛血（無菌 袋裝） 注意事項: 盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。 如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。 染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。 如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。 熒光物質均易發生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。 用于流式細胞儀檢測時,如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞,并且通過調整相關設置和參數也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。 需自備PBS。 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。操作步驟(僅供參考):1、貼壁細胞的消化①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。②加入少量 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的 完全細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。質量標準血清質量高低取決于兩方面因素：一是取材對象，二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數之內，取材過程應嚴格按照操作規程執行，制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。1． 牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當的監測系統。2． 有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。3． 證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑制物。4． 血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。5． 無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染。6． 對細胞有良好的支持繁殖作用
抗凝新生牛血(無菌 pet 瓶裝) 用法 血清由冰凍狀態在常溫下完全融化成液體,搖均勻后放置 10-30 分鐘待結塊蛋白質沉底后即可使用。注意事項 有少量蛋白質結塊析出不影響使用。未融化或融化未經搖勻的血清禁止直接放入高溫水浴內加溫。減少血清重復凍融。血清在室溫或 4 ℃ 冰箱內放置過久會影響促細胞生長效果。解凍 將血清從冰凍區中取出后(切勿直接將血清從 -20 ℃ 進入 37 ℃ 解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀),先置于 2 ~ 8 ℃ 區域中使之融化,然后在室溫下使之全融。使用前再預溫到將使用的溫度(如 37 ℃ ),但必須注意的是,解凍過程中應輕輕地搖晃均勻。血清在解凍過程中可能會出現少量絮狀或片狀析出物,主要是血清中脂蛋白的變性或是纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)析出,但這些析出物,并不影響血清本身的質量。 若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。細胞培養的優點:1.研究的對象是活細胞在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。4.研究內容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。鑒別方法： 血液凝結析出的淡黃色通明液體。如將血液自血管內抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反響被激活，血液敏捷凝結，構成膠凍。其周圍所析出之淡黃色通明液體即為血清，也可于凝血后經離心獲得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉成為纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿zui大的差異。而在凝血反響中，血小板開釋出很多物質，各也都發生了改變。 這些成分都留在血清中并持續發生改變，如原成為，并隨血清寄存時刻逐步削減以致不見。這些也都是與血漿差異的地方。但很多未參與凝血反響的物質則與血漿根本一樣。為防止抗凝劑的攪擾，血液中很多化學成分的剖析，都以血清為樣品。血清保存應該注意以下幾點： (1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂. (2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化. (3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀. (4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清. (5)血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理.顯微鏡下小黑點:經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象小黑點,常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清. (6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.抗凝新生牛血(無菌 pet 瓶裝) 注意事項: 盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。 如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。 染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。 如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。 熒光物質均易發生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。 用于流式細胞儀檢測時,如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞,并且通過調整相關設置和參數也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。 需自備PBS。 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。操作步驟(僅供參考):1、貼壁細胞的消化①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。②加入少量 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的 完全細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。質量標準血清質量高低取決于兩方面因素：一是取材對象，二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數之內，取材過程應嚴格按照操作規程執行，制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。1． 牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當的監測系統。2． 有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。3． 證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑制物。4． 血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。5． 無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染。6． 對細胞有良好的支持繁殖作用
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